直接凝集反應(yīng)-免疫學(xué)技術(shù)
      某些病原微生物或紅細(xì)胞懸液等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時(shí)間出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊，稱為凝集反應(yīng)（agglutination）。
      根據(jù)反應(yīng)的方式不同，凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)和抗球蛋白試驗(yàn)等。直接凝集反應(yīng)時(shí)顆粒性抗原和相應(yīng)抗體直接結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊，為直接凝集反應(yīng)。有玻片凝集法和試管凝集法。前者是一種定性實(shí)驗(yàn)，多用已知診斷血清檢驗(yàn)未知抗原和進(jìn)行細(xì)菌分型，也可以用來鑒定人類紅細(xì)胞ABO血型；后者是一種半定量試驗(yàn)，用于鑒定被檢者血清中有無某些病原菌的抗體及其含量，以協(xié)助臨床診斷或供流行病學(xué)調(diào)查研究。本節(jié)將通過玻片凝集法和試管凝集法詳細(xì)介紹直接凝集反應(yīng)。
（一）玻片凝集試驗(yàn)
（1）取潔凈載玻片1片，一端滴生理鹽水1滴作為對照，另一端滴加診斷血清1滴。
（2）用接種環(huán)取分離好的病原菌，于生理鹽水中和診斷血清中分別混勻（注意不可先涂血清后涂鹽水以免發(fā)生誤差）。
（3）室溫靜置數(shù)分鐘。如果抗原抗體相對應(yīng)出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則診斷血清中出凝集塊，而鹽水側(cè)則為均勻的乳白色。否則為陰性反應(yīng)。
（二）試管凝集反應(yīng)
（1）排列潔凈干燥試管8支于試管架上。
（2）用吸管吸取生理鹽水，分別加0.5ml于各試管中。吸取10倍稀釋的被檢血清，加0.5ml于第一管中。
（3）自第一管開始稀釋，使充分混合，然后吸出0.5ml放入第二管，依次稀釋至第七管，在從第七管內(nèi)吸出0.5ml棄去。第一管至第七管血清稀釋度為1∶20，1∶40，1∶80，1∶160， 1∶320，1∶640；1∶1280。第八管不加血清，作為對照。
（4）吸取診斷菌液，每管加0.5ml（加菌液時(shí)由對照管向前依次加入），此時(shí)每管內(nèi)的血清稀釋度又增加一倍。其操作程序見表15-1。
（5）搖勻后，放37℃溫箱18～24h或37℃水浴箱4h后觀察結(jié)果。觀察結(jié)果時(shí)先觀察對照管，再觀察各試驗(yàn)管。注意觀察凝集顆粒的松軟、大小、均勻度等性狀以及液體的混濁程度。若液體仍呈均勻混濁或經(jīng)振搖后呈混濁者為陰性結(jié)果；上部液體較清亮，同時(shí)管底有凝集塊者為陽性反應(yīng)。陽性反應(yīng)者可根據(jù)下面標(biāo)準(zhǔn)確定凝集的強(qiáng)弱。
＋＋＋＋ ： 完全凝集、上清液澄清。
＋＋＋ ：大部凝集、上清液微混。
＋＋ ：中等凝集、上層液較混濁。
＋ ：少量凝集、上層液混濁。
－ ：無凝集、菌液混濁。
記錄結(jié)果后判定效價(jià)（又稱滴度）。凝集效價(jià)是指能發(fā)生中等凝集（＋＋）現(xiàn)象的*高血清稀釋度。