中性紅染色液

點(diǎn)擊下載日期：2013/11/8 10:29:03

一、中性紅染色液簡介：
中性紅是一種弱堿性pH 指示劑，變色范圍pH6.4～8.0之間(由紅變黃)。分子式：C15H16N4•HCl，分子量：288.78。在中性或微堿性環(huán)境中，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)，因此，進(jìn)入液泡的中性紅便解離出大量陽離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色，在這種情況下，原生質(zhì)和細(xì)胞壁一般不著色；死細(xì)胞由于原生質(zhì)變性凝固，細(xì)胞液不能維持在液泡內(nèi)，因此，用中性紅染色后，不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象，相反，中性紅的陽離子，卻與帶有一定負(fù)電荷的原生質(zhì)及細(xì)胞核結(jié)合，而使原生質(zhì)與細(xì)胞核染色。
中性紅染色液(Neutral Red stain)是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成紅色的染色液。本染色液常用于組織或細(xì)胞染色中細(xì)胞核的紅色復(fù)染。
二、中性紅染色液組成：
Neutral Red stain (0.1%) 100ml 500ml ，主要成分：主要由中性紅、去離子水等組成。
自備材料：
1、4%的多聚甲醛，亦可采購森貝伽公司的多聚甲醛溶液(4% PFA)(DF0135)
2、蒸餾水
3、不同濃度的乙醇
三、操作步驟（僅供參考）：
1. 樣品處理
a) 對于石蠟切片：二甲苯中脫蠟5～10min。換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5～10min。
無水乙醇5min。 90%乙醇2min。 70%乙醇2min。蒸餾水2min。
b) 對于冰凍切片：蒸餾水2min。
c) 對于培養(yǎng)細(xì)胞：
用4%多聚甲醛固定10min以上。蒸餾水洗滌2min。
換用新鮮的蒸餾水，再洗滌2min。
2. 中性紅染色
a) 對于上述處理好的樣品，用Neutral Red stain (0.1%)染色2～5min
b) 用蒸餾水或自來水充分洗滌。
c) 進(jìn)行觀察和拍照。
四、注意事項(xiàng)：
1、如果需要脫水、透明和封片處理，還需自備二甲苯，中性樹膠或其它封片劑。如果樣品
是石蠟切片，需自備70%和90%乙醇，無水乙醇以及二甲苯。
2、首次使用本試劑時(shí)建議先取1~2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
3、中性紅染色液可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間。
4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
五、有效期： 12個(gè)月有效。

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